Les teràpies basades en oligonucleòtids s’han convertit en una de les classes de fàrmacs més prometedores de la medicina moderna. La seva capacitat per atacar malalties a nivell genètic no té parangó, però la seva química planteja un nou conjunt de reptes analítics . Cada modificació en la seqüència, la longitud o la cadena principal pot influir en l’activitat, la seguretat i l’estabilitat. Per tant, tant per als desenvolupadors com per als reguladors, els mètodes fiables per caracteritzar aquestes molècules són essencials per garantir la seva qualitat i consistència al llarg del cicle de vida del producte.
Per abordar aquesta necessitat, Kymos Itàlia ha desenvolupat OligoXplorer , un projecte de recerca i desenvolupament dissenyat per crear una plataforma analítica completa per a la caracterització CMC de teràpies basades en oligonucleòtids .
El projecte s’ha dut a terme en col·laboració amb la Universitat de Camerino (UNICAM) – Escola de Biociències i Medicina Veterinària i ha estat cofinançat per la Regione Marche en el marc del seu programa d’innovació (PR Marche FESR 2021/2027).
Més enllà del seu abast científic, OligoXplorer marca una fita important per a Kymos Group: consolida la nostra experiència en TIDES i amplia la nostra cartera amb les proves CMC per a oligonucleòtids .
Comprensió del repte analític
Els oligonucleòtids se situen entre les molècules petites i els productes biològics , massa grans per als mètodes químics tradicionals, massa petits per a la majoria de bioassajos. La seva gran mida, alta polaritat i tendència a formar estructures secundàries fan que siguin difícils de separar, quantificar i seqüenciar . Com s’ha dit abans, petits canvis en la longitud de la seqüència o en la seva composició química poden afectar la potència, l’especificitat i l’estabilitat .
Per aquest motiu, les agències reguladores esperen paquets CMC complets basats en mètodes analítics ortogonals que confirmin la identitat de la seqüència, quantifiquin el contingut i caracteritzin les impureses ; tot això en condicions validades i reproduïbles.
OligoXplorer es va concebre precisament per abordar aquests reptes: explorar, desenvolupar i validar mètodes capaços de donar suport a totes les etapes de la caracterització d’oligonucleòtids , des del desenvolupament inicial fins a les proves d’alliberament de GMP.
Tres àrees analítiques principals
El projecte es va centrar en tres àrees analítiques principals: seqüenciació, assaig i substàncies relacionades . Cadascun cobreix un atribut crític de qualitat (CQA) en el control d’oligonucleòtids.
Seqüenciació: Confirmació de la identitat molecular
Determinar que un oligonucleòtid porta la seqüència correcta és el primer pas per garantir la seguretat i l’eficàcia .
El nostre equip a Itàlia ha establert i refinat fluxos de treball de LC-MS i HR-MS capaços de confirmar la identitat de seqüència i revelar variants subtils com ara shortmers, longmers o modificacions químiques.
El fraccionament cromatogràfic va ajudar a aïllar aquestes variants abans de l’anàlisi per MS, millorant la resolució i la fiabilitat. El resultat és un conjunt de mètodes que proporcionen dades d’identitat clares i d’alta qualitat adequades per a l’ús rutinari de proves CMC .
Assaig: Mesura del contingut i la força
Quantificar oligonucleòtids és igualment difícil, i fer-ho amb precisió és vital per a la potència i la reproductibilitat de la dosi . Les seves propietats fisicoquímiques poden afectar la recuperació i la resposta, especialment durant les proves rutinàries.
Per superar això, Kymos Itàlia ha desenvolupat i validat mètodes LC-UV i LC-MS per a una quantificació precisa.
La validació del mètode cobreix la linealitat, la precisió i la robustesa, mentre que l’optimització cromatogràfica ajuda a separar el pic principal dels senyals de degradació o impuresa. El resultat és un mètode d’assaig validat i adequat per al seu ús en programes d’alliberament de lots i estabilitat en entorns GMP .
Substàncies relacionades: garantint la puresa i la integritat del producte
Fins i tot petites impureses poden afectar el rendiment terapèutic . Durant la síntesi, els oligonucleòtids poden produir una gamma d’espècies truncades o allargades (n–1, n+1), o generar impureses químiques mitjançant l’oxidació o la despurinació. Identificar-les i quantificar-les és essencial per a la seguretat del producte i el compliment normatiu .
A través d’ OligoXplorer , el nostre equip italià ha establert fluxos de treball de perfilació d’impureses per LC-UV i LC-MS per detectar i quantificar aquestes espècies amb alta sensibilitat. Estudis comparatius entre lots van confirmar la seva idoneïtat per al control de processos i l’avaluació de l’estabilitat.
Junts, aquests desenvolupaments proporcionen una imatge completa de la puresa i la integritat del producte.
Capacitats analítiques complementàries
A més de les àrees analítiques principals desenvolupades a través d’ OligoXplorer , Kymos Group pot cobrir altres proves que sovint es requereixen per a materials i formulacions d’oligonucleòtids . Alguns es duen a terme directament internament, mentre que d’altres es duen a terme a través de socis de confiança amb experiència demostrada en el camp.
Els nostres equips poden determinar el contingut de lípids en formulacions de LNP mitjançant HPLC-CAD , un paràmetre clau per avaluar l’eficiència de l’encapsulació i la consistència de la formulació. També oferim proves de dissolvents residuals, contingut d’acetat de sodi i impureses elementals , garantint el compliment total dels estàndards de qualitat actuals de l’ICH i l’EMA.
La caracterització física és igualment important. Mitjançant la dispersió dinàmica de la llum (DLS), podem mesurar la distribució de la mida de les partícules, l’estat d’agregació i la polidispersió , cosa que ajuda a avaluar l’estabilitat i l’homogeneïtat del producte.
Combinant aquests estudis complementaris amb les nostres anàlisis de CMC, Kymos Group ofereix una imatge completa de la qualitat dels oligonucleòtids .
De la recerca a la implementació
Els mètodes desenvolupats sota OligoXplorer no són només prototips; ja estan implementats a Kymos Itàlia i disponibles com a serveis analítics validats per a desenvolupadors d’oligonucleòtids com una plataforma analítica coherent per a la CMC d’oligonucleòtids. Cada mètode ha estat desenvolupat, optimitzat i validat utilitzant oligos sintètics representatius i ara es pot adaptar a projectes específics de clients.
Això inclou la confirmació de la identitat, la quantificació de l’assaig i la creació de perfils d’impureses, tot realitzat en condicions compatibles amb les GMP i amb el suport dels nostres equips analítics experimentats .
Amb això, Kymos Group es converteix en una de les poques CRO europees que ofereix suport integrat de CMC i bioanalítica per a teràpies d’oligonucleòtids , combinant els punts forts de les nostres instal·lacions a Itàlia i Alemanya.
Mirant cap endavant
Amb OligoXplorer, Kymos Itàlia ara opera com a centre d’excel·lència per a l’anàlisi de CMC d’oligonucleòtids dins del Grup . L’experiència adquirida a través d’aquest projecte ha permès als nostres equips consolidar els seus coneixements en espectrometria de masses, desenvolupament de mètodes cromatogràfics i perfils d’impureses aplicats a oligonucleòtids, capacitats que ara estan totalment disponibles per donar suport als projectes dels clients.
Per als socis que desenvolupen fàrmacs basats en oligonucleòtids, aquestes capacitats signifiquen un suport CMC més ràpid i fiable, des del desenvolupament inicial del mètode fins a la sol·licitud reglamentària.
En definitiva, aquesta iniciativa reforça la missió de Kymos Group: combinar l’excel·lència científica, el compliment normatiu i la innovació en les proves analítiques , ajudant els nostres socis a oferir als pacients medicaments basats en oligonucleòtids més segurs i eficaços.
