尽管 ICH 发布关于药物和活性物质质量评估分析方法验证（ICH Q2）的建议已有 25 年之久，但直到最近（2022-2023 年），我们才获得了一份涵盖生物基质中药物和分析物验证与分析的协调指南。
与药物或成品制剂不同，这些基质具有极高的复杂性，且存在显著的个体或个体间差异。因此，ICH M10 是一项非常重要的协调成果，目前已被 FDA 和 EMA 采用并实施，其他监管机构和管理部门也正在实施过程中。
考虑到这一点，我们的生物分析部门与质量保证部门合作，对旧指南中对生物分析研究影响最大的主要关键点和差异进行了总结与归纳。
引言与范围
ICH M10 描述了预期用于支持监管决策的生物分析方法验证，并为此规定了这些指南适用的特定范围。这些研究包括：
- 作为临床研究替代研究进行的非临床毒代动力学 (TK) 研究和药代动力学 (PK) 研究
- 监管申报中所有阶段的临床试验（包括比较生物利用度/生物等效性 (BA/BE) 研究）。
- 通常指遵循 GLP 或 GCP 的研究
生物标志物除非是研究的主要终点，否则不属于本指南范围。生物基质包括血液、血清、血浆以及其他体液或组织。
一般原则
方法开发
关于方法开发，新的 ICH M10 大部分借鉴了以往的 FDA 指南。方法开发应确定方法的设计、操作条件、局限性以及针对其预期用途的适用性，并确保其已准备好进行验证。
全验证
ICH M10 在 EMA 和 FDA 之前的指南基础上，进一步阐述了何时需要对生物分析方法进行全验证。
色谱分析
验证
ICH M10 为色谱分析方法验证中的每个要素提供了额外的细节和指导，并在新指南中对其中一些要素进行了扩展，甚至创建了新章节。我们的团队总结了与 EMA/FDA 既往指南相比的关键部分和差异：
- 在新的 ICH M10 中，选择性 (Selectivity) 已与专属性 (Specificity) 分开
- 基质效应 (ME)： 关于基质效应，ICH M10 提供了比以往 EMA 和 FDA 更精确的指导，建议对评估的每个单独基质来源/批次进行准确度和精密度测定
- 关于 A&P (准确度与精密度)，ICH M10 在 EMA 和 FDA 的基础上进行了扩展，并结合了它们的一些建议。最重要的一点是，用于这些评估的标准曲线应在至少一个分析批中使用新鲜配制的校准标准品。如果其他分析批中未使用新鲜配制的校准标准品，则应证明冷冻校准标准品的稳定性。
- 稳定性： ICH M10 进一步阐述了 EMA/FDA 既往指南中的内容，并对生物基质中分析物、处理后样品以及储备液和工作液的稳定性提出了具体建议。
研究样品分析
ICH M10 规定，研究样品的分析可在验证完成后进行（此时数据已提交至监管机构），但同时也理解某些参数可能会在稍后阶段完成。ICH M10 在参数和程序上基本保持不变，仅有细微变化和少量补充。
配体结合分析
关键试剂
我们的团队总结了关于配体结合分析关键试剂与 EMA/FDA 既往指南的主要差异：
- 标准对照品： 与 EMA/FDA 一样，ICH M10 不要求一级标准品。关于 CoA 和标准对照品有效期、校准曲线使用同一批次以及批次更换的信息和建议与既往指南一致。
- 关键试剂： 建议基于 EMA/FDA，但值得注意的是，这些关键试剂的稳定性测试应基于其在生物分析中的表现，并参考试剂储存条件的一般指导，且可以延长至供应商提供的有效期之外。
验证
- 专属性： ICH M10 维持了 EMA/FDA 关于专属性程序和接受标准的相同建议，但指出如果存在交叉反应，必须评估其影响。
- 选择性： ICH M10 指出，基质可能含有非特异性基质成分，可能会干扰目标分析物。相比过去，一些扩展建议包括分析低端的选择性、加标水平以及相关人群情况下的最少患者数量。接受标准保持不变。
- 标准曲线和范围： 关于标准曲线和范围，ICH M10 与既往指南基本一致，但也指出最好使用新鲜配制的校准标准品。接受标准相同，仅有细微的扩展点。
- 准确度和精密度： 这些参数的主要区别在于，ICH M10 建议 QC 样品应通过在基质中加标制备，并在预期的研究样品条件下储存。它还增加了一个新的 QC 制备浓度水平（中浓度，约在几何平均值附近），并建议应使用相同的分析批和数据评估准确度和精密度。接受标准基于 EMA 和 FDA。
- 稀释线性与钩状效应： 我们可以看到与 EMA/FDA 相同的建议（两者的协调），并有少量补充。在接受标准方面，ICH M10 建议研究样品分析期间采用的稀释倍数应在验证期间评估的稀释倍数范围内。
- 稳定性： ICH M10 规定稳定性应涵盖处理和储存条件，且稳定性样品应涵盖研究样品的整个浓度范围。对于生物药物，新指南补充说可以采用括号法（在两个温度点之间），关于程序和接受标准的建议与协调后的内容一致。
研究样品分析
- 分析批：分析批的组成和 QC 在批中的放置与 EMA/FDA 相同，当分析多个板时，每个板应包含一套单独的校准标准品和 QC。
ICH M10 的一个关键点是 QC 应涵盖预期的研究样品浓度范围。此外还指出，允许进行单孔分析（验证和研究样品均可）。
关于标准曲线和接受标准，ICH M10 是 EMA 和 FDA 的协调产物，所有合格分析批中 QC 的总平均准确度和精密度应在每个浓度水平上进行计算，并在分析报告中体现。
- 研究样品复测：关于复测的原因、标准和样品数量，建议与 EMA/FDA 一致。ICH M10 规定，样品的分析应基于与初始分析相同的每个研究样品孔数。
实测样品复测 (ISR)
根据 ICH M10，ISR 旨在验证报告的样品分析物浓度的可靠性，并应在 EMA 和 FDA 规定的情形下执行，这些情形现已在新指南中合并并协调。研究类型、数量、样品选择和计算方式保持不变。
结论
如本文综述所示，ICH M10 为生物分析研究提供了一个协调的框架，该框架已被 FDA 和 EMA 实施，并已成为分析生物基质中药物和分析物的标准。
自我们采用这一新指南以来，客户对新版验证方案和样品分析方案的反馈非常积极，确认了我们的方法和程序符合 ICH M10 要求。
如果您需要关于此新指南的更多信息或对您的项目有任何协助需求，请联系 quotes@kymos.com。我们将竭诚为您提供详细的咨询与支持。
