L’electroforesi és una tècnica analítica àmpliament utilitzada per a la determinació de la puresa i la identificació de proteïnes terapèutiques. Aquesta tècnica es basa en la migració de les proteïnes sota un camp elèctric segons la seva mobilitat electroforètica. Depenent del tipus d’electroforesi, es poden mesurar diferents atributs de qualitat de la proteïna. La sensibilitat, la robustesa i el rendiment dependran del format utilitzat, sent els formats clàssics de gel pla/vertical desplaçats pels formats capil·lars més nous a causa dels seus avantatges inherents. Els assaigs electroforètics en diferents tipus i formats s’inclouen actualment com a mètode de prova en els certificats d’anàlisi per a proves per lots de proteïnes terapèutiques.
Moltes proteïnes com ara citocines, factors sanguinis, hormones, anticossos monoclonals (mAbs) i proteïnes de fusió s’analitzen mitjançant diferents tècniques d’electroforesi com a eina per identificar i comprovar la seva integritat.
Segons els principis aplicats a la tècnica, es poden distingir diversos tipus d’electroforesi:
- SDS-PAGE ( electroforesi en gel de policrilamida i dodecil sulfat de sodi ) : es realitza en format de gel pla o vertical i permet separar les proteïnes segons els seus pesos moleculars .
- PAGE ( electroforesi en gel de policrilamida ): es realitza en format de gel pla o vertical i permet separar les proteïnes segons les seves càrregues.
- IEF ( I so Electric Focusing ): es realitza en format de gel pla o vertical i permet separar les proteïnes segons els seus punts isoelèctrics.
- CE-SDS ( electroforesi capil·lar – dodecil sulfat de sodi ): es realitza mitjançant la tecnologia d’electroforesi capil·lar i permet separar les proteïnes segons els seus pesos moleculars. Aquesta tècnica té una millor sensibilitat, rendiment i reproductibilitat que la SDS-PAGE clàssica.
- CZE ( electroforesi de zona capil·lar ): es realitza mitjançant la tecnologia d’electroforesi capil·lar i permet separar les proteïnes segons les seves mobilitats electrosmòtiques. Aquesta tècnica té una millor sensibilitat, rendiment i reproductibilitat que la PAGE clàssica. A més, té una àmplia gamma d’aplicacions, sent l’anàlisi de glicans una de les principals aplicacions en la caracterització d’anticòs monoclonals.
- cIEF ( capil·lar I so Elèctric Focusing ): es realitza mitjançant la tecnologia d’electroforesi capil·lar i permet separar les proteïnes segons els seus punts isoelèctrics. Aquesta tècnica té una millor sensibilitat, rendiment i reproductibilitat que l’IEF clàssica.
- icIEF (imaging capillary I so Electric Focusing) : Aquesta tècnica es duu a terme mitjançant la tecnologia d’electroforesi capil·lar i permet separar les proteïnes segons els seus punts isoelèctrics. Aquesta tècnica és similar a la cIEF però té un millor rendiment.
Totes aquestes tècniques electroforètiques estan disponibles a Kymos utilitzant diferents instruments i actualment s’apliquen al control de qualitat tant de proteïnes terapèutiques innovadores com biosimilars:
- Cambres electroforètiques i proveïdors d’energia de diferents mides i fabricants (Bio-Rad, etc.) per a electroforesi clàssica
- Sistemes d’electroforesi Multiphor ll de GE Healthcare Life Sciences per a electroforesi plana
- Densitòmetre calibrat GS-900 de Bio-Rad per convertir els gels d’electroforesi en imatges digitals i processar les dades amb el programari adequat.
- Sistemes d’electroforesi capil·lar Beckman/Sciex PA800 per a CE, SDS, CZE i cIEF.
- iCE3 de Protein Simple per a icIEF.
