基于寡核苷酸的疗法已成为现代医学中最具前景的药物类别之一。它们在基因层面靶向疾病的能力是无与众不同的，但其化学特性也带来了一系列新的分析挑战。序列、长度或骨架的每一处修改都可能影响活性、安全性和稳定性。因此，可靠的表征方法对于开发人员和监管机构确保产品整个生命周期的质量和一致性至关重要。
为了满足这一需求，Kymos 意大利开发了 OligoXplorer，这是一个研发项目，旨在为基于寡核苷酸疗法的 CMC 表征创建一个全面的分析平台。
该项目是与 卡美日诺大学 (UNICAM) 生物科学与兽医学院合作开展的，并由 马尔凯大区 在其创新计划 (PR Marche FESR 2021/2027) 下共同资助。
除了科学范畴之外，OligoXplorer 还标志着 Kymos 集团的一个重要里程碑：它巩固了我们在 TIDES 领域的经验，并通过寡核苷酸的 CMC 测试扩展了我们的业务组合。
了解分析挑战
寡核苷酸介于小分子和生物制品之间，对于传统的化学方法来说太大，而对于大多数生物测定来说又太小。它们庞大的体积、高极性以及形成二级结构的倾向，使其难以分离、定量和测序。如前所述，序列长度或其化学性质的微小变化都会影响效力、特异性和稳定性。
出于这个原因，监管机构期望获得全面的 CMC 资料包，这些资料包建立在正交分析方法之上，以确认序列身份、定量含量并表征杂质；所有这些都需在经过验证且可重复的条件下进行。
OligoXplorer 的构思正是为了应对这些挑战：探索、开发和验证能够支持寡核苷酸表征各个阶段的方法，从早期开发到 GMP 放行测试。
三大主要分析领域
该项目专注于三个主要分析领域：测序、含量测定和相关物质。每个领域都涵盖了寡核苷酸控制中的关键质量属性 (CQA)。
测序：确认分子身份
确定寡核苷酸携带正确的序列是确保安全性和有效性的第一步。
我们在意大利的团队已经建立并完善了 LC-MS 和 HR-MS 工作流程，能够确认序列身份并揭示细微的变体，如短体、长体或化学修饰。
色谱分级有助于在质谱分析之前分离这些变体，从而提高分辨率和可靠性。其成果是一套能够提供清晰、高质量身份数据的方法，适用于常规 CMC 测试。
含量测定：测量含量和强度
寡核苷酸的定量同样具有挑战性，而准确地进行定量对于效力和剂量的可重复性至关重要。它们的理化性质会影响回收率和响应，尤其是在常规测试期间。
为了克服这一困难，Kymos 意大利开发并验证了用于精确量化的 LC-UV 和 LC-MS 方法。
方法验证涵盖了线性、精密度和稳健性，而色谱优化有助于将主峰与降解或杂质信号分离。其结果是获得了一种经过验证、符合用途的含量测定方法，可用于 GMP 环境中的批次放行和稳定性研究项目。
相关物质：确保纯度和产品完整性
即使是微小的杂质也会影响治疗效果。在合成过程中，寡核苷酸会产生一系列截短或延长的物种 (n–1, n+1)，或通过氧化或脱嘌呤产生化学杂质。识别并量化这些物质对于产品安全和监管合规至关重要。
通过 OligoXplorer，我们的意大利团队建立了 LC-UV 和 LC-MS 杂质谱分析工作流程，以高灵敏度检测和量化这些物种。跨批次的对比研究确认了它们在工艺控制和稳定性评估中的适用性。
这些进展共同提供了产品纯度和完整性的完整图景。
补充分析能力
除了通过 OligoXplorer 开发的核心分析领域外，Kymos 集团还可以涵盖寡核苷酸材料和制剂通常需要的其他测试。其中一些直接在内部进行，而另一些则通过在该领域拥有丰富经验的可靠合作伙伴进行。
我们的团队可以通过 HPLC-CAD 测定 LNP 制剂中的脂质含量，这是评估包封率和制剂一致性的关键参数。我们还提供残留溶剂、乙酸钠含量和元素杂质的测试，确保完全符合现行的 ICH 和 EMA 质量标准。
物理表征同样重要。利用动态光散射 (DLS)，我们可以测量粒径分布、聚集状态和多分散性，有助于评估产品的稳定性和均一性。
通过将这些补充研究与我们的 CMC 分析相结合，Kymos 集团提供了寡核苷酸质量的完整图景。
从研究到实施
在 OligoXplorer 下开发的方法不仅仅是原型；它们已经在 Kymos 意大利实施，并作为针对寡核苷酸开发人员的经过验证的分析服务提供，作为一个连贯的寡核苷酸 CMC 分析平台。每种方法都使用具有代表性的合成寡核苷酸进行了开发、优化和验证，现在可以适应特定的客户项目。
这包括身份确认、含量定量和杂质谱分析，所有这些都在符合 GMP 的条件下进行，并由我们经验丰富的分析团队提供支持。
凭借这一点，Kymos 集团成为少数几家能为寡核苷酸疗法提供综合 CMC 和生物分析支持的欧洲 CRO 之一，结合了我们在意大利和德国分支机构的优势。
展望未来
凭借 OligoXplorer，Kymos 意大利现在作为集团内寡核苷酸 CMC 分析的卓越中心运营。通过该项目获得的经验使我们的团队能够巩固在质谱、色谱方法开发以及应用于寡核苷酸的杂质谱分析方面的专业知识，这些能力现在已完全可用于支持客户项目。
对于开发寡核苷酸药物的合作伙伴来说，这些能力意味着从早期方法开发到监管提交，都能获得更快、更可靠的 CMC 支持。
最终，这一举措强化了 Kymos 集团的使命：将卓越科学、监管合规和分析测试创新相结合，助力我们的合作伙伴为患者提供更安全、更有效的寡核苷酸药物。
