La sécurité microbiologique des produits biologiques est une étape critique tout au long du développement, de la fabrication et de la libération des lots. Les produits biologiques nécessitent une stratégie d’essais complète permettant de vérifier l’absence de contamination microbienne tout en démontrant la conformité aux exigences internationales des pharmacopées et aux exigences réglementaires.
Une stratégie complète de contrôle microbiologique est essentielle pour évaluer les risques potentiels de contamination aux différentes étapes du développement et de la fabrication du produit. Chez Kymos Group, notre laboratoire de microbiologie certifié GMP soutient cette stratégie grâce à des services de contrôle qualité microbiologique pour les produits biologiques, les thérapies cellulaires et géniques, les vaccins et d’autres produits pharmaceutiques stériles et non stériles.
Une approche complète
La sécurité des produits repose sur une combinaison d’essais qui évaluent les risques de contamination à différentes étapes de la fabrication et du contrôle qualité.
Ces évaluations microbiologiques sont souvent réalisées en parallèle des essais de contrôle qualité physico-chimiques et analytiques, offrant une approche intégrée de la caractérisation des produits et de la libération des lots.
Biocontamination
(Conformément à la Ph. Eur. 2.6.12 ; USP <1119>)
L’essai de biocontamination détermine la population totale de micro-organismes viables présents dans les matières premières, les API ou les produits finis avant la stérilisation ou le traitement aseptique. Il s’agit d’une mesure critique de contrôle qualité utilisée pour évaluer l’état microbiologique des procédés de fabrication. La surveillance de routine des niveaux de biocontamination permet de s’assurer que les procédés restent sous contrôle et soutient la validation ainsi que l’efficacité continue des procédures de stérilisation.
Essais des limites microbiennes : TAMC, TYMC et micro-organismes spécifiés
(Conformément à la Ph. Eur. 2.6.12/Ph. Eur. 2.6.13 ; USP <61>/ USP <62>)
Contrairement à l’essai de biocontamination, l’essai des limites microbiennes est utilisé pour les produits pharmaceutiques non stériles afin d’évaluer la qualité microbiologique du produit et de vérifier que la population microbienne reste dans des limites acceptables définies par les pharmacopées pertinentes.
L’essai comprend :
- Dénombrement des micro-organismes aérobies totaux (TAMC) : dénombrement des bactéries aérobies.
- Dénombrement total des levures et moisissures (TYMC) : dénombrement des levures et des champignons filamenteux.
- Détection de micro-organismes spécifiés, tels que Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Salmonella spp., Candida albicans ou des bactéries Gram négatives tolérantes à la bile, selon la catégorie de produit et la voie d’administration.
Essai de stérilité
(Conformément à la Ph. Eur. 2.6.1, USP<71>)
L’essai de stérilité confirme l’absence de micro-organismes viables dans les produits destinés à être stériles. Réalisé dans des conditions aseptiques strictement contrôlées, il s’agit d’un essai critique de contrôle qualité et d’une exigence clé pour la libération des lots de produits biologiques stériles et de produits injectables.
Pour les essais sur produits stériles, notre laboratoire de microbiologie comprend une salle blanche dédiée équipée de deux isolateurs à 4 gants, d’une pompe Steritest® Symbio® et d’un système de biodécontamination au H₂O₂. Cette technologie avancée d’isolateurs minimise le risque de contamination externe tout en garantissant des essais de stérilité fiables conformément aux exigences des pharmacopées.
Essai des endotoxines bactériennes
(Conformément à la Ph. Eur. 2.6.14 ; USP <85> et <86>)
Les endotoxines bactériennes, issues de la membrane externe des bactéries Gram négatives, peuvent rester présentes même après l’élimination des micro-organismes. Administrées aux patients, les endotoxines peuvent induire de sévères réactions pyrogènes, ce qui rend leur détection essentielle pour les produits médicaux, en particulier les produits biologiques parentéraux.
Le choix d’une méthode appropriée de détection des endotoxines dépend des caractéristiques du produit et des exigences applicables. Plusieurs méthodologies validées sont disponibles, notamment :
- LAL chromogénique cinétique
- LAL turbidimétrique cinétique
- Essai de gélification (gel-clot)
- Réactif recombinant de cascade (rCR)
Détection rapide des mycoplasmes par qPCR : détection précoce pour de meilleures décisions
En plus des méthodes microbiologiques conventionnelles, des approches moléculaires peuvent permettre une détection plus rapide de contaminants spécifiques. La détection rapide des mycoplasmes par qPCR est particulièrement précieuse pour la surveillance des cultures cellulaires, des banques cellulaires, des vecteurs viraux et d’autres produits biologiques, permettant une détection précoce de la contamination.
Chez Kymos, une détection des mycoplasmes par qPCR conforme aux exigences GLP est disponible pour soutenir les activités de développement.
Par rapport aux méthodes traditionnelles basées sur la culture, la qPCR offre :
- Des résultats en quelques heures au lieu de plusieurs semaines
- Une sensibilité et une spécificité analytiques élevées
- Une détection précoce de la contamination
L’adoption croissante des techniques d’amplification des acides nucléiques (NAT), dont la qPCR, se reflète dans les recommandations actuelles des pharmacopées. Le chapitre révisé de la Pharmacopée européenne « 2.6.7 Mycoplasmes » reconnaît les méthodes validées basées sur les NAT comme faisant partie du cadre réglementaire pour la détection des mycoplasmes, tandis que le nouveau « USP <77> Mycoplasma Nucleic Acid Amplification Tests » fournit des recommandations pour la validation et l’application de méthodes NAT qualitatives. Ces révisions mettent en évidence l’acceptation croissante des technologies basées sur la PCR pour la détection des mycoplasmes lorsqu’elles sont correctement validées pour l’usage prévu.
Services intégrés de microbiologie GMP pour les produits biologiques
Garantir la sécurité microbiologique des produits biologiques nécessite plus qu’un seul essai. La combinaison appropriée de méthodes microbiologiques et moléculaires dépend du produit, du procédé de fabrication, du stade de développement et des exigences réglementaires applicables.
Notre laboratoire de microbiologie associe des installations de pointe, un personnel hautement spécialisé et une vaste expertise réglementaire afin d’accompagner les fabricants tout au long du cycle de vie du produit, du développement de procédé et du transfert de technologie à la validation des méthodes, aux études de stabilité et à la libération des lots commerciaux.
Cette approche intégrée contribue à garantir que les risques microbiologiques sont efficacement évalués, surveillés et maîtrisés, tout en soutenant la conformité aux exigences GMP internationales, une libération fiable des produits et, en fin de compte, la sécurité des patients.
