La electroforesis es una técnica analítica ampliamente utilizada para la determinación de la pureza y la identificación de proteínas terapéuticas. Esta técnica se basa en la migración de las proteínas bajo un campo eléctrico según su movilidad electroforética. Según el tipo de electroforesis, se pueden medir diferentes atributos de calidad de la proteína. La sensibilidad, la robustez y el rendimiento dependerán del formato utilizado, siendo los formatos clásicos de gel plano/vertical reemplazados por los formatos capilares más modernos debido a sus ventajas inherentes. Los ensayos electroforéticos en diferentes tipos y formatos se incluyen actualmente como método de prueba en los certificados de análisis para el análisis por lotes de proteínas terapéuticas.
Muchas proteínas, como citocinas, factores sanguíneos, hormonas, anticuerpos monoclonales (mAb) y proteínas de fusión, se analizan utilizando diferentes técnicas de electroforesis como herramienta para identificar y probar su integridad.
Según los principios aplicados a la técnica, se pueden distinguir varios tipos de electroforesis:
- SDS-PAGE ( Electroforesis en gel de poliacrilato de sodio y dodecil sulfato sódico ) : se realiza en formato de gel plano o vertical y permite separar las proteínas en función de sus pesos moleculares.
- PAGE ( Electroforesis en gel de poliacrilamida ): se realiza en formato de gel plano o vertical y permite separar las proteínas según sus cargas.
- IEF ( IsoElectric Focusing ): se realiza en formato de gel plano o vertical y permite separar las proteínas según sus puntos isoeléctricos.
- CE-SDS ( electroforesis capilar con dodecilsulfato de sodio ): se realiza mediante electroforesis capilar y permite separar las proteínas según su peso molecular. Esta técnica ofrece mayor sensibilidad, rendimiento y reproducibilidad que la SDS-PAGE clásica.
- CZE (electroforesis capilar en zona ): se realiza mediante electroforesis capilar y permite separar las proteínas según su movilidad electrosmótica. Esta técnica ofrece mayor sensibilidad, rendimiento y reproducibilidad que la PAGE clásica. Además, tiene una amplia gama de aplicaciones, siendo el análisis de glicanos una de las principales en la caracterización de mAb.
- cIEF ( Enfoque Isoeléctrico Capilar ): Se realiza mediante electroforesis capilar y permite separar las proteínas según sus puntos isoeléctricos. Esta técnica ofrece mayor sensibilidad, rendimiento y reproducibilidad que la IEF clásica.
- icIEF ( imagen capilar con enfoque isoeléctrico ): Esta técnica se realiza mediante electroforesis capilar y permite separar las proteínas según sus puntos isoeléctricos. Esta técnica es similar a la cIEF, pero ofrece un mayor rendimiento.
Todas estas técnicas electroforéticas están disponibles en Kymos utilizando diferentes instrumentos y actualmente se aplican al control de calidad tanto de proteínas terapéuticas innovadoras como de biosimilares:
- Cámaras electroforéticas y fuentes de alimentación de diferentes tamaños y fabricantes (Bio-Rad, etc.) para electroforesis clásica
- Sistemas de electroforesis Multiphor ll de GE Healthcare Life Sciences para electroforesis plana
- Densitómetro calibrado GS-900 de Bio-Rad para convertir los geles de electroforesis en imágenes digitales y con el software adecuado procesar los datos.
- Sistemas de electroforesis capilar Beckman/Sciex PA800 para CE.SDS, CZE y cIEF.
- iCE3 de Protein Simple para icIEF.
